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實時熒光定量PCR系統
技術的基本原理
在PCR反應體系中加入熒光染料或熒光基團，這些熒光物質有其特定的波長。儀器可以自動檢出，利用熒光信號積累，實時監測整個PCR進程，在PCR循環中，測量的信號將作為熒光閾值的坐標。并且引入一個Ct值概念，Ct值是指產生可被檢測到得熒光信號所需的小循環數，是在PCR循環過程中熒光信號由本底開始進入指數增長階段的拐點所對應的循環次數。
熒光閾值相當于基線熒光信號的平均信號標準偏差的10倍。一般認為在熒光閾值以上所測出的熒光信號是一個可信的信號，可以用于定義一個樣本的Ct值。通常用不同濃度的標準樣品的Ct值來產生標準曲線，然后計算相對方程式。
方程式的斜度可以用來檢查PCR的效率，所有標準曲線的線性回歸分析需要存在一個高相關系數，這樣才能認為實驗的過程和數據是可信的，使用這個方程式計算出未知樣本的初始模板量。實時熒光定量PCR儀都有軟件，可以從標準曲線中自動地計算出未知樣本的初始模板量。
實時熒光定量PCR系統的軟件特點：
●反應板設置指南軟件使實驗設計非常簡單，包括復雜的多色熒光實驗；
●可選擇快速、標準或者9600反應模式；
●實時監測擴增曲線；
●實驗過程中可以增加PCR循環數；
●自動設置熒光基線，自動計算熒光閾值使數據分析大大簡化；
●可在同一反應板采用多種標準曲線對靶基因進行定量，可以簡化工作流程以及下游產物分析；
●基因表達相對定量軟件提供強大的結果分析顯示，可以自動將多達10塊96孔板基因表達實驗數據同時分析，并自動去除無關項數據；
●自動SNP分析軟件可以簡單直觀的圖表輸出分型結果并自動進行分型質量評分；
●解離曲線數據采集操作簡單，觀察方便，可以在儀器運行時觀察解離曲線數據；
●觀察實時擴增曲線時可以非常方便的標定所對應的樣品孔位置；
●光源使用時間監測及儀器系統自我診斷程序。
